疏水作用色谱法
在疏水作用色谱法(HIC)中,弱非极性固定相与高浓度的盐的水溶液同时使用。该方法主要通过减少盐的浓度来分离蛋白。
在反相色谱中,蛋白通过与填料上烷基或芳基相互作用保留下来。不同于反相色谱,在疏水反应色谱中上述官能团的密度较低,且蛋白分子只在一个或少数几个位置上吸附。盐浓度较高时会产生吸附作用,但若加入低百分比浓度的有机溶剂降低盐浓度,则会产生脱附作用。
尽管二者均以疏水作用为基础,但HIC分离的选择性明显不同于反相色谱。与RPC相比,HIC可在温和条件下进行测定,所以不会在分离过程中使生物大分子(蛋白质、肽等)发生变性,能在保持活性的状态下完成稳定的分离。此外,HIC还可以对离子交换色谱法无法分离的蛋白结构异构体进行分离。HIC的另一个优点是可以不吸附核酸及糖类等亲水性较高的杂质而直接分离去除。
TSKgel HIC 色谱柱
TSKgel HIC 色谱柱由三种从低到高不同疏水性的配体(丁基、醚和苯基)键合在聚甲基丙烯酸酯上的填料组成的。
醚柱与苯基柱所用的聚甲基丙烯酸酯基树脂是一种多孔材料,孔径大小为1000A,排阻限为1,000,000道尔顿,能提供高载量与高上样量。
TSKgel Butyl-NPR 是无孔基质。在该基质上,只有颗粒表面能进行吸附。较短的运行时间和良好的回收率使丁基柱成为高通量或QC分析的理想选择。三种柱类型之间的比较请详见图1。
新产品TSKgel HIC-ADC Butyl色谱柱适用于分析蛋白质、ADC的DAR值。
图 1. 常规HIC色谱柱和无孔HIC色谱柱的比较