正相与亲水作用色谱法
反相是应用最广的HPLC保留方式,但极性很大的化合物常常不能充分保留在低百分比有机相中,甚至不能保留在100%含水流动相中。对于含有相同组分的样品,正相洗脱顺序与RPC中的洗脱顺序正好相反。尽管正相LC在传统上采用非极性有机流动相和硅固定相,但如今,多数正相分离法均采用含水有机流动相和极性较强的键合固定相。该HPLC方式目前普遍称为HILIC,即亲水作用色谱法。
如果采用强极性键合相(如TSKgel Amide-80),正相或亲水作用色谱法(HILIC;见参考资料)可改善极性化合物的保留行为,其保留机理是使用乙腈与乙酸铵缓冲液的混合流动相。与反相保留行为相反,在HILIC中,通过增加乙腈百分比可更长时间地保留样品中的极性成分。
| TSKgel Amide-80 | TSKgel NH2-100 |
键合相 | 不与还原性糖反应。 提高流动相的温度最高到80℃可以防止端基异构体的形成。 | - NH2-100键合相由于引入了氨基烷基进行特殊封端,比常规的氨基相更稳定。 - 氨基键合相可与还原性糖反应形成席夫碱。 |
检测器 | 可与蒸发光散射(ELS)和质谱(MS)检测器一起使用 |
流动相 | 在100%有机洗脱液中表现稳定 |
溶质 | 保留强极性备选药物和药物代谢产物 |
应用 | - 糖类 - 多元醇 - 药物代谢产物 - 多肽 - 三聚氰胺和三聚氰酸 - 寡核苷酸 - 发酵液中的极性化合物 - 胞嘧啶 | - 糖类 - 多元醇 - 氨甲喋呤聚谷氨酸衍生物 - 吡啶基胺寡糖 - 水溶性维生素 - 核酸片段 |